免疫分析常用酶
酶聯(lián)免疫分析酶技術(shù)具有高敏感性的關(guān)鍵是選用有生物放大作用的酶作為標(biāo)記物。酶免疫分析中使用的酶要求符合下列一些條件：1酶的純度高、催化反應(yīng)的轉(zhuǎn)化速率高、酶作用的專一性強(qiáng)； 2酶蛋白分子具有足夠的偶聯(lián)用標(biāo)記基團(tuán)，用各種化學(xué)方法與抗原、抗體蛋白分子偶聯(lián)處理后，仍保持較高的催化活性；3使用穩(wěn)定性和保存穩(wěn)定性好；4測定酶活性的方法要求簡便、靈敏、快速；5待測體液中不應(yīng)存在與標(biāo)記酶相同的酶，以防干擾任用；6待測溶液中應(yīng)無底物、反應(yīng)抑制劑和其他干擾因素存在；7酶的來源、純化和供應(yīng)較方便，8均相酶免疫測定法中使用的酶，還要求當(dāng)抗體與半抗原－酶結(jié)合物結(jié)合后，酶的活性表現(xiàn)出抑制或激活。
在實(shí)驗(yàn)中目前常用的示蹤酶有辣根過氧化物酶、堿性磷酸酶以及葡萄糖氧化酶、β－D－半乳糖苷酶等。其中，根據(jù)分子量的大小及酶反應(yīng)性的特點(diǎn)，在固相或非固相酶標(biāo)免疫測定時(shí)應(yīng)加以選擇。
在酶聯(lián)免疫分析技術(shù)中，由于酶標(biāo)復(fù)合物常通過細(xì)胞膜進(jìn)入細(xì)胞內(nèi)與靶分子結(jié)合，因此所用的標(biāo)記應(yīng)選擇分子量低而酶活性高的酶類。在標(biāo)記酶的質(zhì)量評價(jià)中，通常需要兩個(gè)指標(biāo)：一個(gè)是RZ比值，另一個(gè)是活性單位。RZ表示酶的純度，即酶蛋白中活性部分與非活性部分大吸光度的比值。通常根據(jù)酶的物理化學(xué)性質(zhì)來確定它是否適合作標(biāo)記物。與各向異性標(biāo)記物相比，酶有多種測定方法，而且通過二級放大還可測定分子量很小的酶，這說明酶是一類通用的標(biāo)記物，可以在各種分析中廣泛應(yīng)用，從簡易的操作到高靈敏的自動(dòng)化程序，因此，酶是一種優(yōu)良標(biāo)記物，但酶比熒光化合物或化學(xué)發(fā)光化合物更易受到環(huán)境因素的影響而失活。此外酶免疫分析法在低檢測限或檢測范圍方面的局限性有待進(jìn)一步改進(jìn)，但是這種局限性可以通過選擇終點(diǎn)測定法來消除。
